背 景 概 述

mRNA技术作为一种新型的平台技术，广泛应用于预防性疫苗、治疗性疫苗、肿瘤治疗、免疫治疗、蛋白替代、基因编辑等方向。mRNA在体外转录合成中，不仅产生所需的mRNA产物，还包括反应酶（T7 RNA 聚合酶、无机焦磷酸酶）、NTP、DNA模板、盐离子及副产物(dsRNA、截断RNA片段)等杂质，这些杂质的存在会影响mRNA的准确定量、降低蛋白翻译效率、产生免疫原性等。因此在体外转录后需要通过纯化将目标mRNA从IVT混合物中分离纯化，提高目标产物的纯度和完整性，保证产品的安全性和有效性。

常规的mRNA纯化方式主要有：氯化锂(LiCl)沉淀、磁珠纯化、硫酸铵沉淀、亲和层析纯化等，其中沉淀法、磁珠法操作相对简单快捷但体量小，因此多应用于早期研发。在工业生产中，层析纯化是最主要的纯化方法，但是需要专业的纯化设备。

瀚海新酶推出轻量级的mRNA亲和层析纯化试剂盒，无需专业纯化设备，操作简便，在 30 分钟内即可完成样本的纯化，并产生高纯度和低NTP残留的目标产物，纯化后的mRNA 可用于各种下游实验。

1. 1. 氯化锂(LiCl)沉淀法
2. 2. 磁珠纯化法
3. 3. 硫酸铵沉淀法

亲 和 层 析

原理介绍：

亲和层析的主流方法是Oligo dT亲和色谱，Oligo dT 填料以聚苯乙烯为基质，表面覆盖大量羟基、官能化聚(dT)基团。高盐条件下，盐离子屏蔽同样带负电荷的填料骨架与mRNA的静电排斥作用，使得mRNA分子和Oligo dT柱配基的构象变得松弛，mRNA的poly(A) 尾与官能化聚(dT)基团碱基配对形成氢键，从而捕获 mRNA 分子，而缺乏 Ploy(A) 尾的杂质如：游离核苷酸、短链转录本、酶等则无法结合到Oligo dT柱上。当缓冲液没有盐时，dT配基主链上的磷酸根负电荷和poly (A) 主链上的磷酸根负电荷之间的静电排斥使其远超氢键作用，从而使mRNA 顺利洗脱下来，收率可高达 90% 以上。

传统的亲和层析需要专业的纯化设备，纯化工艺需要不断摸索，以满足于mRNA的工业生产。现瀚海新酶推出轻量级的亲和层析纯化试剂盒，无需专业的纯化设备仅需离心即可，在30分钟内完成样本的纯化，纯化后的mRNA可用于各种下游实验，能够在保证高质量同时快速方便的获得mRNA。

产品特点

高效灵活：适合不同起始量的 RNA 样品，可纯化 mg 级 mRNA 样本

便捷经济：无需纯化设备及低温设备，且操作简单，节约设备和人力成本

重复性好：纯化的 mRNA 完整度高，NTP 去除效果明显，操作时间在 30 分钟内完成，可以满足各种实验需要

操作流程图

性能数据

亲和层析纯化试剂盒与 LiCl 沉淀的纯化方法相比：在提高 CE 完整度、SEC 纯度以及 NTP 的去除上有较好的效果。

不同Poly A长度mRNA片段和LiCl纯化方法比较

同一片段的 mRNA 序列，自研纯化试剂盒与 LiCl 沉淀的纯化方法相比：不同 Ploy A 尾片段在完整度上均有提高。

产品信息

参考文献：

[1] LiCl Precipitation for RNA Purification, Retrieved Jan 8, 2024.

[2] RNA Clean XP Performance and Data, Retrieved Jan 8, 2024.

[3] D Prazeres, T Schluep, C Coony, Preparative purification of supercoiled plasmid DNA using anion exchange chromatography, J Chromatogr A 806 (1998) 31–45.

[4] J Koubek, KF Lin, YR Chen, RP Cheng, JJT Huang, Strong anion-exchange fast performance liquid chromatography as a versatile tool for preparation and purification of RNA produced by in vitro transcription, RNA 19 (2013) 1449-1459.

[5] Xue Feng, Zhengjun Li, Zhiguo Su, Shiyi Che, Baiqian Dai, Yuan Cheng, Songping Zhang. Rapid and high recovery isolation of mRNA from in vitro transcription system by ammonium sulphate precipitation at room temperature. Separation and Purification Technology. Volume 336, 2024, 126331.