mRNA质检服务
- Quality Inspection Services for mRNA -

mRNA检测服务

质量控制作为药物开发最重要的一环,对于药物成分、杂质等的分析是药物开发过程中的重中之重。瀚海新酶提供mRNA药物质检服务

自主建立的质量控制分析平台
mRNA加帽率检测
mRNA Poly(A)分布检测
质粒分析方法开发验证
LNP组分含量分析方法开发验证
产品和工艺杂质研究
原辅料检测
一站式CMC整体解决方案
提交需求
销售确认
样品检测
输出报告
服务流程:

帽结构及加帽率检测原理

mRNA的结构主要包括 5'端帽子( cap,简称帽子) 、5'端非翻译区(untranslated region,UTR)、开放阅读框( open reading frame,ORF) 、3'端非翻译区和多聚腺苷酸尾巴 [Poly( A) ]等结构。成熟的真核生物 mRNA的 5'端都有1个甲基鸟苷帽( m7G) 结构。加帽能够帮助mRNA 被顺利转运出细胞核,增加 mRNA 稳定性,防止其被核糖核酸酶降解,对蛋白的表达至关重要。



加帽率检测目前采用的主要手段是先合成与5'UTR区前50nt左右相配对的含有生物素的探针,让探针和mRNA结合,然后用RNase H进行酶切,利用链霉亲和素磁珠特异性的富集带有帽子结构序列的探针,最后将探针上的含有帽子结构的序列洗脱下来,进入到LC-MS进行分析。





Poly(A)结构及Poly(A)分布检测原理

真核生物的mRNA通常在其3'端有一段腺苷,根据物种的不同,其长度从20到200多个碱基不等。最近有一些研究表明mRNA较长的尾巴可以提高翻译效率,提供mRNA的稳定性,并影响免疫反应。

目前主要采用RNase T1酶进行酶切,酶切后的Poly(A)片段用Oligo DT填料进行富集,将富集在填料上的Poly(A)片段洗脱下来后进入到 LC-MS进行分析。

Beverly M.; Dell A.; Parmar P.; Houghton L. Label-free analysis of mRNA capping efficiency using RNase H probes and LC-MS. Anal. Bioanal. Chem. 2016, 408 (18), 5021–5030. 10.1007/s00216-016-9605-x.
交付标准
- DELIVERY STANDARDS -
服务类别 
用时(工作日)
交付
标准
加帽率检测探针设计合成
5
探针
根据客户需求确定 
加帽率检测样品前处理
2
前处理样品
加帽率检测样品上机检测
3-10
检测报告
Poly(A)分布检测样品前处理
2
前处理样品
Poly(A)分布检测样品上机检测
3-10
检测报告
过往案例
- CASE -
加帽率检测
Poly(A)分布检测
Name
Response 
Observed  mass (Da) 
Expected mass (Da) 
Mass error (mDa) 
Mass error (ppm) 
Cap1(%) 
Monphos
38908
7004.38
7004.29
88.1
12.6
95.1%
Triphos
1052878
7164.47
7164.25
223.1
31.1
Triphos_a
506256
6835.27
6835.05
225.3
33.0
Diphos_a
101498
6755.32
6755.07
256.5
38.0
cap1
23880426
7471.69
7471.55
143.2
19.2
cap1_gaa
1924043
6468.05
6467.93
125.6
19.4
cap1_a
5077712
7142.48
7142.34
138.5
19.4
cap1_aa
2301145
6813.27
6813.13
139.1
20.4
加帽率检测分子量匹配表
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- SERVICE ORDERING -
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